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FGF-23試劑盒的測試步驟是這樣子嗎?

2021-11-26 瀏覽次數:26

 
  FGF-23試劑盒是近來發現的相關蛋白大家族中的新成員。其基因編碼一個含250個氨基酸殘基的蛋白。FGF-23的氨基末端(aa1-24)是疏水的且很可能作為其進入血液循環的信號肽。它的羧基末端(aa180-251)與FGF蛋白家族的其它成員僅有有限的氨基酸同源性。
  測定人體血液中的FGF-23水平可以為不同程度的低磷血癥和高磷血癥患者的實驗室評估提供重要的診斷工具。此外,對FGF-23的靈敏測定可以為骨骼調節和礦化動態提供新的見解。用于測定血清,血漿及相關液體等樣本,例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本。
  FGF-23試劑盒的測試步驟:
  1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
  2、酶標板置4℃,包被過夜。
  3、洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后,即甩去,之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
  4、陰性對照孔每孔加入pbs50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
  5、酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
  6、洗板,同4。
  7、每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
  8、酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
  9、洗板,同4。
  10、每孔加tmb顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
  11、每孔加100μl2mol/lh2so4終止反應。
  12、分別測450nm吸光值w1和630nm吸光值w2,終測得的od值為兩者之差w1-w2,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
  13、數據處理:在得出標本s和陰性對照n的od值后,計算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標準。
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